畜牧兽医学报
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畜牧兽医学报
 
2018年 49卷 4期
刊出日期:2018-04-23


遗传育种
生物技术与繁殖
营养与饲料
预防兽医
临床兽医
研究简报
   
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封面封底
2018 Vol. 49 (4): 0-0 [摘要] ( 12 ) [HTML 1KB] [PDF 451KB] ( 22 )
0
中文目次
2018 Vol. 49 (4): 0-0 [摘要] ( 16 ) [HTML 1KB] [PDF 359KB] ( 24 )
0
英文目次
2018 Vol. 49 (4): 0-0 [摘要] ( 7 ) [HTML 1KB] [PDF 167KB] ( 17 )
遗传育种
659 李文博, 陈霞, 苑忠央, 迂莹莹, 吴桂琴, 石凤英, 杨宁, 徐桂云, 郑江霞
蛋壳胶护膜性状的遗传特性及其与蛋壳品质性状的关联分析

旨在通过对某洛岛红蛋鸡纯系的胶护膜品质及其它蛋壳品质指标进行评价,在阐述该性状的重要性及遗传特性的同时分析它与其它蛋壳品质的遗传和表型关联,进而为国产褐壳/粉壳蛋鸡品种的胶护膜性状优化选育、鸡蛋自身抗菌性能的强化提高提供理论支持。本研究测定了北京市华都峪口禽业有限责任公司洛岛红蛋鸡纯系120个家系共计3 283只母鸡的蛋壳胶护膜品质,运用DMU软件估计了其遗传力及其与蛋壳品质性状的遗传相关和表型相关。结果表明,该洛岛红蛋鸡纯系的胶护膜品质为(24.24±9.13)%,应用DMU软件估计其遗传力为0.40,为中等遗传力。蛋壳颜色(L*、a*、b*)、蛋壳强度和蛋壳厚度分别为(61.45±4.91)、(17.79±2.34)、(30.59±2.50),(3.22±0.75)kg·cm-2和(324.85±42.37)μm,并且都属于中等或中等偏下遗传力性状,范围从0.39到0.17。胶护膜品质与蛋壳颜色(L*、a*、b*)3个指标呈现出不同程度的遗传相关,分别为-0.49、0.43、-0.27;胶护膜品质与蛋壳强度和厚度之间的遗传相关系数分别为0.02和0.13,相关程度较小。蛋壳厚度和蛋壳强度之间的遗传相关较高,为0.72。结果显示,胶护膜性状遗传力较高,对该性状进行直接选择可以获得较快的育种进展。胶护膜品质与蛋壳颜色(L*、a*、b*)具有不同程度的遗传相关,对鸡蛋胶护膜的强化选育可能会同时加深蛋壳颜色。胶护膜品质与蛋壳强度、蛋壳厚度之间的遗传相关较低,说明在选择蛋壳胶护膜性状时不会对蛋壳强度和厚度性状产生明显影响。

2018 Vol. 49 (4): 659-666 [摘要] ( 29 ) [HTML 1KB] [PDF 1211KB] ( 93 )
667 温丽娟, 刘发伟, 林长光, 陈子韬, 张哲, 张豪, 李加琪, 袁晓龙
Nhlh2基因启动子活性及其表达调控的初步研究

旨在研究母猪Nhlh2基因启动子活性及其与转录因子之间的调控关系,为探索该基因的表达调控提供分子水平的依据,也为研究母猪繁殖机制提供一定的参考。本研究以猪卵巢组织DNA为模板,PCR扩增Nhlh2不同长度的启动子缺失片段,克隆到pGL3-basic载体构建启动子报告基因重组质粒,并将其转染到猪卵巢颗粒细胞,测定相对双荧光素酶活性值;通过染色质免疫共沉淀技术(ChIP),研究Nhlh2启动子与YY1、C/EBPβ蛋白之间的相互作用;随后构建转录因子超表达、突变载体和小干扰RNA(siRNA),利用双荧光素酶检测系统进行活性验证。经双荧光素酶报告系统检测发现,Nhlh2基因的P7(-238~+129)区域启动子转录活性最高,-654~-238片段范围可能存在负调控元件,-238~-20区域可能存在正调控元件;通过生物信息学分析和ChIP验证,Nhlh2启动子区-101~-85和-153~-140区域分别是转录因子YY1和C/EBPβ的结合位点;突变YY1和C/EBPβ的结合位点后,P7的双荧光活性显著上调;超表达YY1和C/EBPβ后,P7的双荧光活性显著下调;干扰YY1和C/EBPβ的表达后,P7的双荧光活性显著上调。本研究确定了猪Nhlh2基因的核心启动子区域为-238~+129,YY1和C/EBPβ分别结合在Nhlh2基因启动子区的-101~-85和-153~-140区域,抑制猪Nhlh2基因的转录活性。

2018 Vol. 49 (4): 667-674 [摘要] ( 51 ) [HTML 1KB] [PDF 1699KB] ( 82 )
675 赵艳艳, 乔利英, 景炅婕, 潘洋洋, 任端阳, 王书芳, 吕宣增, 刘文忠
miR-142和miR-144靶向FoxO1基因调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在预测并验证调节FoxO1基因表达的关键miRNAs及其调节脂肪分化的机制。本研究利用4个在线软件预测与FoxO1基因具有潜在靶标关系的miRNAs。用双荧光素酶报告系统检测荧光活性。用荧光定量PCR、Western blotting和油红O染色,分别在mRNA和蛋白水平上检测miRNA对FoxO1表达的影响以及对绵羊前体脂肪细胞分化的调节作用。结果表明,miR-142和miR-144与FoxO1具有靶标关系。过表达miR-142和miR-144显著抑制了双荧光素酶报告载体的荧光活性,下调了FoxO1 mRNA(P<0.01)及其编码蛋白的表达(P<0.05)。miR-142和miR-144均可促进绵羊前体脂肪细胞分化,加快脂滴形成。由此证明,miR-142和miR-144靶向负调节FoxO1的表达,进而通过FoxO1对PPARγ的负调节促进绵羊前体脂肪细胞的分化。

2018 Vol. 49 (4): 675-684 [摘要] ( 46 ) [HTML 1KB] [PDF 2750KB] ( 81 )
685 林森, 林亚秋, 朱江江, 许晴, 赵越, 池永东, 王永
Wnt10b对山羊前体脂肪细胞分化相关基因表达的影响

旨在利用RNA干扰技术,明确Wnt10b基因对山羊前体脂肪细胞分化的影响。设计合成山羊Wnt10b siRNA序列,利用胶原酶消化法获得山羊皮下和肌内前体脂肪细胞。利用有效的siRNA序列干扰山羊皮下和肌内前体脂肪细胞Wnt10b基因表达后,检测其对细胞分化及脂肪细胞分化标志基因表达的影响。结果表明,筛选获得有效的山羊Wnt10b siRNA序列,转染山羊皮下和肌内前体脂肪细胞后,Wnt10b被显著干扰,其mRNA表达量分别下调63%(P<0.01)和67%(P<0.01);油红O染色结果显示,干扰Wnt10b基因可明显抑制山羊皮下和肌内脂肪细胞的脂滴积聚;且干扰Wnt10b基因后,在皮下前体脂肪细胞分化过程中C/EBPβPPARγSREBP1和AP2基因出现极显著下调(P<0.01),LPL出现显著下调(P<0.05);而在肌内前体脂肪细胞分化过程中,AP2和LPL基因出现极显著下调(P<0.01),C/EBPβ出现显著下调(P<0.05),Pref1出现极显著上调(P<0.01)。本试验发现,Wnt10b基因可能通过调控C/EBPβPPARγSREBP1和LPL的表达来促进山羊皮下前体脂肪细胞分化,通过调控AP2、LPLC/EBPβPref1的表达来促进山羊肌内前体脂肪细胞分化。

2018 Vol. 49 (4): 685-692 [摘要] ( 34 ) [HTML 1KB] [PDF 1684KB] ( 69 )
693 章杰, 何航, 刘安芳, 罗宗刚, 陈磊
猪季节性高低温的分子适应性研究

旨在探讨环境温度变化对猪能量代谢的影响,为阐明猪适应性进化的分子调控机制奠定理论基础。选取6月龄荣昌猪为研究对象,分别在季节性高温和低温时期,采集12头猪的大脑、心、肝、肺、肾、眼肌和腰肌,检测其mtDNA拷贝数及能量代谢相关基因表达水平。结果表明:猪体重增长率与环境温度呈现极显著相关性(|r|≥0.77,P<0.01);不同组织mtDNA拷贝数在低温组和高温组之间表达模式高度一致(r=0.92,P<0.01);与低温组相比,高温组除了心,其它组织的mtDNA拷贝数均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低,同时各组织中调控mtDNA生物合成的TWINKLE基因表达水平也显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低;能量代谢相关基因(ND1、COX1、ATP6和CYTB)在组织中的表达水平基本上均是低温组显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于高温组,而眼肌中ND1和COX1基因,肝和心中CYTB基因在低、高温组间无显著差异(P>0.05),大脑中CYTB基因在高温组显著高于低温组(P<0.05);除了肺组织(P<0.01),其余组织中HSP70基因表达水平在低、高温组间无显著差异(P>0.05)。综上表明,猪可通过调节基因转录水平及线粒体DNA拷贝数来重塑代谢,进而适应环境温度的变化。

2018 Vol. 49 (4): 693-700 [摘要] ( 62 ) [HTML 1KB] [PDF 1707KB] ( 164 )
生物技术与繁殖
701 黄莎, 孙思, 邓洁, 胡煜, 练雨, 王鲜忠
TGF-β调节仔猪睾丸支持细胞增殖的机制

旨在研究TGF-β对仔猪睾丸支持细胞增殖相关蛋白及基因表达的影响,进一步揭示TGF-β调控仔猪支持细胞增殖的作用机制。本研究用TGF-β及TGF-β/Smad通路抑制剂LY2109761处理培养的仔猪睾丸支持细胞,通过CCK-8与流式细胞术检测支持细胞活性和细胞周期,Western blotting检测Smad3的蛋白磷酸化水平,实时定量PCR(RT-qPCR)检测c-Myc mRNA、Skp2 mRNA及ssc-miRNA-24的表达。此外,支持细胞转染ssc-miRNA-24模拟物、抑制剂后,用TGF-β处理支持细胞,检测相关基因和蛋白的表达。结果表明,TGF-β以剂量依赖方式影响支持细胞活性;180 pg·mL-1 TGF-β以时间(0~24 h)依赖方式影响细胞增殖指数(Proliferation index,PI)和S期细胞比例(S-phase cell fraction,SPF),抑制Smad3磷酸化,增加c-Myc mRNA、Skp2 mRNA、ssc-miRNA-24的表达;10 μmol·L-1 LY2109761促进TGF-β诱导支持细胞活性,并增加细胞增殖指数和S期细胞比例。ssc-miRNA-24模拟物抑制Smad3磷酸化,促进c-MycSkp2 mRNA表达;ssc-miRNA-24抑制剂则具有相反的效果。综上表明,在仔猪睾丸支持细胞中,TGF-β可通过增加ssc-miRNA-24的表达,抑制Smad3磷酸化,增强c-MycSkp2 mRNA的表达,促进支持细胞增殖。

2018 Vol. 49 (4): 701-708 [摘要] ( 35 ) [HTML 1KB] [PDF 1995KB] ( 74 )
709 蒲思颖, 郑杰, 杨远潇, 王琴, 杨绕芬, 字向东
牦牛新鲜囊胚与玻璃化冻融囊胚转录组的比较分析

旨在探讨牦牛在囊胚玻璃化冷冻前后转录组差异表达,明确玻璃化冷冻对牦牛囊胚基因表达谱的影响。采用体外受精生产的牦牛新鲜囊胚和玻璃化冻融囊胚为研究对象,分别提取总RNA,使用Smart-seq2方法进行扩增、构建文库、转录组测序(RNA-seq),以|log2(冻胚/鲜胚)|≥1和Q<0.05为阈值筛选差异表达基因(DEG),并对DEGs进行GO功能富集和KEGG分析。结果表明,冷冻前后牦牛囊胚中分别检测到9 827和13 567个转录本。在两个文库共筛选出11 174个DEGs,其中有7 037个在冻融囊胚上调,4 137个下调。有10 538个DEGs显著富集(P<0.05)到479条GO terms上,共涉及318条通路,其中真核生物的核糖体合成、剪接体和神经活性配体-受体互作等8条通路显著富集(P<0.05)。本研究利用RNA-seq技术分析了牦牛囊胚在玻璃化冷冻前后转录组变化,为探讨牦牛囊胚冷冻损伤机制及进一步完善冷冻方法提供理论依据。

2018 Vol. 49 (4): 709-717 [摘要] ( 32 ) [HTML 1KB] [PDF 1230KB] ( 87 )
718 许红, 孙研研, 石雷, 刘一帆, 白皓, 李云雷, 黄子妍, 叶建华, 贾亚雄, 王梁, 陈继兰
SOX5蛋白对公鸡精子发生和精子活力的作用及其定位

本研究旨在探明SOX5蛋白在家禽睾丸发育中的表达规律,分析其在睾丸发育和精子活力调控中的潜在作用。采用RT-qPCR和Western blot技术检测0、5、15、40和60周龄北京油鸡公鸡睾丸中SOX5 mRNA和蛋白的表达,并比较其在40周龄正常公鸡与弱精子症公鸡睾丸中的表达差异,通过免疫组化技术对SOX5蛋白在睾丸组织中的表达进行定位。结果表明,SOX5 mRNA和蛋白在不同周龄公鸡的睾丸中均有表达,且差异显著(P<0.05)。SOX5 mRNA和蛋白表达量趋势一致;随着周龄的增加,其表达呈现先上升后降低的趋势:0和5周龄SOX5蛋白主要在精原细胞和支持细胞中表达;15周龄SOX5蛋白在支持细胞、各级精母细胞、圆形精子细胞和成熟精子中均高表达;40周龄表达量有所降低。SOX5基因和蛋白的表达趋势与公鸡性成熟和繁殖机能衰退的趋势一致,即性成熟前后和繁殖高峰期表达量较高,在性发育前和生精机能减退时表达量较低。此外,40周龄弱精子症公鸡睾丸中,SOX5的表达显著低于正常公鸡(P<0.05)。综上表明,SOX5的表达量与公鸡睾丸发育水平和精子活力存在一定的相关,可能对其具有重要调控作用。

2018 Vol. 49 (4): 718-724 [摘要] ( 31 ) [HTML 1KB] [PDF 2756KB] ( 71 )
营养与饲料
725 丁雪梅, 钟丽梅, 李东东, 曾秋凤, 张克英, 白世平, 王建萍
颗粒饲料中小麦粉碎粒度对肉鸡生产性能和肠道屏障功能的影响

旨在研究颗粒饲料中不同小麦粉碎粒度对肉鸡生产性能和肠道屏障功能的影响。本试验选用385只1日龄健康AA肉公鸡,分为5个处理,小麦分别通过2、4、6、8、10 mm 5种孔径的筛片粉碎成5种粉碎粒度,每个处理7个重复,每个重复11只鸡。试验饲粮为小麦-豆粕型。试验期42 d,分1~21 d和22~42 d两阶段。分别在试验第22和43天,每个重复屠宰1只鸡,测定空肠形态、黏膜紧密连接蛋白和炎性因子的基因表达及盲肠食糜中微生物的数量。结果表明:1)小麦粉碎粒度显著影响肉鸡1~21 d阶段增重(BWG)、采食量(FI)和料肉比(F/G)(P<0.05),且小麦粉碎粒度与阶段增重和F/G呈显著的二次曲线关系(P<0.05);对22~42 d和1~42 d BWG和FI均无显著影响(P>0.05),随着小麦粉碎粒度增加,F/G显著增大(P<0.05),呈显著的线性关系(P<0.05)。2)随着小麦粉碎粒度的增加,空肠绒毛高度和绒隐比显著增加(P<0.05),且与隐窝深度呈显著的二次曲线关系(P<0.05)。3)小麦粉碎粒度可显著影响21 d肉鸡空肠黏膜occludinIL-4的mRNA表达量(P<0.05);小麦粉碎粒度线性影响肉鸡盲肠微生物的数量(P<0.05),显著增加乳酸杆菌的数量(P<0.05),降低沙门氏菌、大肠杆菌、产气荚膜梭菌的数量(P<0.05)。由此可见,在颗粒饲粮中(含木聚糖酶),小麦粉碎粒度为580~760 μm(筛片孔径为4~6 mm)时对肉鸡生产性能和肠道屏障功能有利。

2018 Vol. 49 (4): 725-735 [摘要] ( 39 ) [HTML 1KB] [PDF 1228KB] ( 99 )
736 郭威, 郭晓军, 周贤, 李术娜, 朱宝成
复合菌剂发酵玉米秸秆对绵羊瘤胃液细菌多样性的影响

旨在通过16S rDNA高通量测序技术研究发酵玉米秸秆对绵羊瘤胃液细菌多样性的影响。本研究选用装有瘤胃瘘管的南非肉用美利奴♂×东北细毛羊♀的F1代成年公羊12只,随机平均分为两组,分别饲喂青贮玉米秸秆和发酵玉米秸秆。分别在饲喂前1天、饲喂第7、21天晨饲后6 h取瘤胃液。同一时间所采取的同一处理的样品混合均匀,分别命名为青贮组(CS:YD0、YD7、YD21)和发酵组(FCS:YS0、YS7、YS21),之后通过高通量测序进行分析。结果显示:1)绵羊瘤胃内细菌群落包括29个门,74个纲,135个目,215个科和428个属。2)青贮组以拟杆菌门(Bacteroidetes)为优势菌群,其次为黏胶球形菌门(Lentisphaerae)、厚壁菌门(Firmicutes)和纤维杆菌门(Fibrobacteres),发酵组优势菌亦为拟杆菌门,其次为厚壁菌门、黏胶球形菌门和纤维杆菌门。通过21 d的饲喂试验可知,青贮组拟杆菌门和厚壁菌门所占比例较发酵组降低,两组黏胶球形菌门和纤维杆菌门菌群数量都有所增加,但青贮组增加幅度更大。3)拟杆菌门的普雷沃氏菌属(Prevotella)在发酵组饲喂7 d后成为最优势菌属(丰度达15.56%),而在青贮组明显降低(丰度从10.48%降至3.17%);纤维杆菌属(Fibrobacter)相对丰度在饲喂21 d后青贮组增加量大于发酵组。4)在97%相似性水平下,饲喂21 d后发酵组的Shannon和Simpson指数更高,表明它拥有更高的瘤胃细菌多样性。复合菌剂发酵玉米秸秆提高了绵羊瘤胃细菌多样性。饲喂发酵玉米秸秆的绵羊瘤胃内拟杆菌门和厚壁菌门菌群的比例降低,而黏胶球形菌门和纤维杆菌门菌群的数量增加。

2018 Vol. 49 (4): 736-745 [摘要] ( 15 ) [HTML 1KB] [PDF 4258KB] ( 45 )
746 吴学壮, 杨颖, 刘汇涛, 高秀华, 杨福合, 戴四发, 邢秀梅
饲粮铜水平对育成期雄性水貂铜元素代谢和血清生化指标的影响

旨在探讨饲粮不同铜水平对雄性水貂铜代谢、血清微量元素含量、血脂和血清抗氧化指标的影响。本研究选取(60±3)日龄的健康雌性水貂80只,随机分为8个组,每组10个重复,分别饲喂在基础日粮中添加0(Control组)、4(Cu4组)、8(Cu8组)、16(Cu16组)、32(Cu32组)、64(Cu64组)、128(Cu128组)和256 mg·kg-1(Cu256组)铜的试验饲粮。试验预试期7 d,正试期45 d。正试期开始第30天,每组选择8只水貂进行铜元素代谢指标测定;饲养试验结束后,采集血液样品进行血清生化指标测定。结果表明:1)水貂摄入铜、粪铜、尿铜和铜在体内的沉积量随日粮铜水平增加呈一次线性和二次曲线极显著增加(linear,quadratic,P<0.01)。2)水貂血清铜含量随日粮铜水平的增加而升高(linear,quadratic,P<0.01)。3)水貂血清总胆固醇(TC,linear,quadratic,P<0.01)和甘油三酯(TG,linear,P<0.05;quadratic,P<0.01)含量随日粮铜水平的增加呈线性和二次曲线降低。4)水貂血清铜蓝蛋白(CER)和铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn SOD)活性随日粮铜水平的增加呈二次曲线先增加后降低(quadratic,P<0.01)。综合以上指标可见,水貂日粮添加铜可以增加体内铜的沉积量和血清铜含量,同时能够降低血清胆固醇和甘油三酯水平,提高抗氧化酶活性。

2018 Vol. 49 (4): 746-753 [摘要] ( 11 ) [HTML 1KB] [PDF 744KB] ( 41 )
预防兽医
754 赵子君, 饶明章, 陈建, 张杰, 袁丽霞, 廖明, 曹伟胜
K亚群禽白血病病毒5'LTR序列及启动活性分析

通过对ALV-K 5'LTR序列及其启动活性比较分析,以探究5'LTR对ALV-K体外复制能力的影响。选取广东某黄羽祖代种鸡场健康鸡群中分离到的ALV-K(GDFX0601)毒株作为研究对象,将其5'LTR核苷酸序列与国内外不同亚群ALV分离株比较分析,并将该ALV-K接种DF-1细胞,采用ELISA对细胞培养上清进行ALV p27抗原检测以分析其在DF-1细胞上的复制能力,还分别将ALV-K(GDFX0601)、ALV-J(CHN06)、ALV-E(ev-1)和ALV-K(JS11C1)5'LTR克隆进pGL3-Basic载体,分别转染DF-1、CEF和293T细胞后测定荧光素酶活性来评估不同毒株5'LTR的启动活性。结果显示,ALV-K(GDFX0601)与其他内源性ALV LTR相似性为98.5%,而与其他外源性ALV的相似性仅有70%左右,且其LTR U3区转录调节元件与外源性病毒差异较大,与内源性病毒相似。ALV-K(GDFX0601)在ALV易感细胞DF-1上的复制速度与感染能力均弱于外源性病毒ALV-A、ALV-B和ALV-J。5'LTR的启动活性试验发现ALV-K(GDFX0601)毒株LTR的启动活性比ALV-J和LTR为外源性的ALV-K(JS11CI)毒株的启动活性弱(P<0.05)。ALV-K比其他亚群ALV复制能力低可能与5'LTR启动活性有关。

2018 Vol. 49 (4): 754-760 [摘要] ( 15 ) [HTML 1KB] [PDF 2836KB] ( 43 )
761 杨恒, 肖雷, 李占鸿, 孟锦昕, 杨振兴, 吕敏娜, 林栩慧, 廖德芳, 牛保生, 李华春
2012—2016年中国南方地区帕利亚姆血清群病毒的分离与序列特征分析

旨在从牛、羊监控动物群中,对流行于我国的帕利亚姆血清群病毒(PALV)进行分离、鉴定与序列特征分析,明确我国流行毒株与国外毒株之间的关系。自监控动物采集的PALV阳性血液接种BHK-21细胞进行病毒分离;对所分离PALV毒株的Seg-7与Seg-2基因节段进行扩增、测序与序列分析;通过高分辨率琼脂糖凝胶电泳分析不同血清型PALV代表毒株基因组的“电泳带型”特征;通过免疫荧光与中和试验分析不同血清型PALV的阳性血清之间的交叉反应特性与中和活性。试验结果如下:2012—2016年,在云南、广西、广东共计分离出19株PALV;Seg-2与Seg-7测序与系统发育分析显示,分离毒株分属Chuzan virus(CHUV)、D’Aguilar virus(DAV)与Bunyip Creek virus(BCV)三种血清型,不同血清型毒株均与日本毒株具有最近的亲缘关系,而与澳洲、非洲毒株亲缘关系较远。病毒基因组电泳结果显示PALV基因组呈现“3-3-4”的电泳带型特征。免疫荧光结果显示针对CHUV的多克隆抗体可使感染CHUV、DAV与BCV的BHK-21细胞呈现特异性荧光。血清学中和试验显示,CHUV、DAV与BCV三种病毒的阳性血清之间无交叉中和保护作用。本研究报道了2012—2016年中国PALV的分离与Seg-2、Seg-7序列特征,并首次报道了PALV的DAV与BCV两种血清型病毒在我国的分离,研究结果将有助于掌握我国PALV的分布与遗传特征,为诊断试剂的开发、流行病学调查与致病性研究提供科学依据。

2018 Vol. 49 (4): 761-770 [摘要] ( 14 ) [HTML 1KB] [PDF 2871KB] ( 33 )
771 王楷宬, 庄青叶, 邱源, 王素春, 侯广宇
临床样本中水貂嵌杯病毒的全基因组分析

为分析水貂嵌杯病毒中国株的特性,采用高通量测序方法测定青岛某养殖场检测的水貂嵌杯病毒的基因组,并对其进行特性分析与比较基因组研究。结果显示,该病毒全基因大小为8 427 bp,具有与其他嵌杯病毒相似的结构和基因顺序,5'端具有帽子结构,3'端具有A尾,其与19株代表性毒株的全基因组和衣壳蛋白氨基酸序列同源性分析都证实该病毒与我国2011年报道的水貂嵌杯病毒同源性高,BLAST进一步确认该病毒不属水貂肠道嵌杯病毒,分析结果也对了解嵌杯病毒中各种未分属病毒的分类提供参考。

2018 Vol. 49 (4): 771-776 [摘要] ( 10 ) [HTML 1KB] [PDF 1933KB] ( 40 )
777 杜吉革, 朱真, 薛麒, 李启红, 印春生, 彭小兵, 姚文生, 康凯, 陈小云
产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体的免疫保护力评价

旨在获得产气荚膜梭菌ε毒素的重组突变体,并评价其毒力及免疫原性。对已知的D型产气荚膜梭菌ε毒素编码基因进行了优化设计和人工合成,同时引入3个氨基酸点突变:第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸,第106位组氨酸突变为脯氨酸。将该基因片段克隆至原核表达载体pET30a-(+)中进行表达,并纯化。利用Western blot方法检测纯化蛋白质与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清的反应性,并检测其对小鼠的毒力。随后,以纯化的重组蛋白质免疫兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。结果表明,ε毒素的重组突变体为可溶性表达,通过灰度扫描,其表达量比例可达40%;该蛋白质能与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清反应,小鼠安全试验显示,6.25×106 ng·kg-1的蛋白质仍无毒力;免疫兔血清对D型产气荚膜梭菌ε毒素的中和效价在一免后可达50~60最小致死量(MLD),二免后可达400~450 MLD;用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组4/4死亡,免疫组得到保护。由此表明,产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体无毒力且保留了良好的免疫原性,为D型产气荚膜梭菌病新型疫苗的研制提供了重要的实验数据。

2018 Vol. 49 (4): 777-785 [摘要] ( 11 ) [HTML 1KB] [PDF 1242KB] ( 47 )
786 吴艳阳, 杨东东, 高冬生, 李永涛, 常洪涛, 王川庆, 赵军
胞内劳森菌LsaA蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立胞内劳森菌特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的胞内劳森菌表面蛋白LsaA的编码基因克隆于pET32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的重组LsaA蛋白作为包被抗原,通过一系列条件优化,建立了检测胞内劳森菌抗体的间接ELISA方法。结果显示:该方法可以特异地检测抗胞内劳森菌抗体,与大肠杆菌、猪霍乱沙门菌、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等常见猪腹泻病原的抗血清均无交叉反应。来自PCR检测粪便呈胞内劳森菌阳性猪的血清,用所建立ELISA检测均为胞内劳森菌抗体阳性。该方法具有较好的敏感性和重复性,阳性血清经过1∶800稀释检测结果仍为阳性,批内和批间重复试验的变异系数分别为0.352%~2.752%和0.877%~3.000%。应用建立的ELISA方法对河南省部分地区猪场胞内劳森菌的感染情况进行了血清流行病学调查,结果显示被检地区猪场均存在不同程度的胞内劳森菌抗体阳性,阳性率在13.3%~57.1%,平均阳性率为30.6%。结果表明,本研究所建立的ELISA方法可以用于胞内劳森菌抗体的检测,为胞内劳森菌感染的监测和流行病学调查提供了方法。

2018 Vol. 49 (4): 786-793 [摘要] ( 13 ) [HTML 1KB] [PDF 1057KB] ( 28 )
794 陈通, 朱育星, 蔡雯祎, 杨琦玥, 邓志和, 兰道亮
人工感染沙门菌牦牛脾中相关差异表达基因筛选

旨在从基因组转录水平解析牦牛抗沙门菌感染相关免疫基因及其调控网络。以牦牛沙门菌为模式病原体,以牦牛为研究对象,在12、24、48 h三个不同时间段利用RNA-Seq测序技术对感染牦牛的外周免疫器官脾进行转录组测序。通过比较分析三个时间段感染牦牛和健康牦牛转录组数据,筛选出差异基因,然后对这些差异基因进行GO、KEGG功能分析,并进行共表达网络分析。结果共筛选出413个差异基因,其中185个表现为上调,228个表现为下调,GO分析显示,与生物过程相关的类别比例最大,其中最为富集的是细胞过程、代谢过程、生物调节、生物过程的调控及单一有机体过程。KEGG分析显示,各时间段富集前20的通路中,与感染、免疫相关的通路占有较大比例,这些通路涉及的差异基因主要为趋化因子。WGCNA分析显示,处于网络枢纽的基因共66个,处于网络中心的基因是SCOCNOCT。本研究在组学层面上探讨了牦牛脾细胞与沙门菌的分子互作机制。

2018 Vol. 49 (4): 794-803 [摘要] ( 12 ) [HTML 1KB] [PDF 1436KB] ( 45 )
804 胡孟娟, 周丽娜, 牛延萍, 徐立新, 宋小凯, 李祥瑞, 严若峰
捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶对山羊PBMCs免疫功能的影响

旨在探究捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶(Hc58)对山羊外周血单个核细胞(PBMCs)免疫功能的影响。采集健康山羊血液,分离出PBMCs和单核细胞,分别以质量浓度为0、10、20、40 μg·mL-1的重组蛋白Hc58与细胞体外共培养,采用硝酸还原酶法测定不同浓度Hc58对单核细胞分泌一氧化氮(NO)的影响;采用流式细胞术检测重组蛋白对单核细胞吞噬FITC-dextran能力的影响;采用荧光定量PCR检测PBMCs中IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ和TGF-β的mRNA转录情况;采用迁移小室研究重组蛋白对PBMCs迁移的影响;采用流式细胞术检测不同浓度Hc58对PBMCs凋亡的影响。研究表明重组蛋白Hc58显著促进山羊单核细胞分泌NO;并且增强了山羊单核细胞的吞噬能力;Hc58显著上调IL-2、IL-4、IL-17、IFN-γ的表达量;Hc58显著提高山羊PBMCs凋亡比例,也使PBMCs迁移率增加。捻转血矛线虫半胱氨酸蛋白酶能通过多种途径影响宿主PBMCs发挥免疫作用。

2018 Vol. 49 (4): 804-810 [摘要] ( 32 ) [HTML 1KB] [PDF 2904KB] ( 52 )
临床兽医
811 贾发杰, 牛胜, 张宁, 李欣, 宁官保, 张鼎, 李宏全, 马海利, 郝卫芳, 高文伟, 赵宇军, 高诗敏, 李桂兰, 李建慧, 闫芳, 高荣琨, 田文霞
重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导胫骨软骨发育不良肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响

为研究胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡红细胞免疫相关基因转录水平的变化及重组鸡谷胱甘肽S-转移酶A3(chGSTA3)蛋白对TD肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响,将120只肉雏鸡饲喂一周后,随机分为基础日粮组(A、B、C组)和福美双处理组(D、E、F组),对福美双处理组肉鸡通过饲料中添加100 mg·kg-1福美双诱发建立肉鸡TD模型,通过腿部肌肉注射法,对B组和E组肉雏鸡注射有活性的低剂量(20 μg·kg-1)重组GSTA3蛋白,对C组和F组肉雏鸡注射高剂量(50 μg·kg-1)重组GSTA3蛋白,对A和D组的肉雏鸡注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS);使用Real-time PCR对肉鸡红细胞中免疫基因的信使RNA(mRNA)转录水平进行检测。结果显示,Toll样受体(TLR)2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、髓样分化因子88(MyD88)、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族中的C5型受体(NLRC5)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白细胞介素-7(IL-7)基因可以在鸡红细胞转录;福美双处理组D与磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理组A相对比,TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、MyD88、TRAF6、MHCⅡ和NLRC5在试验的第4天显著升高,IL-7显著降低(P<0.05),在试验的第15天TD肉鸡红细胞中TLR2、TLR4、MyD88和NLRC5显著下调(P<0.05),IL-7、TLR3、TLR5、TLR7、TLR15、MHCⅡ、TRAF6变化不明显(P>0.05);E组和F组与D组相比,在试验第4天,除E组TLR4、TLR5和MyD88外,其余基因都有显著性变化(P<0.05);在第15天,E组中TLR4、TLR5、MyD88和NLRC5,及F组中TLR3、TLR5、MyD88、TRAF6和IL-7变化不显著,其他基因都有显著性差异(P<0.05)。鸡红细胞可能通过免疫相关基因TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、IL-7、MyD88、TRAF6、MHCⅡ和NLRC5转录水平的变化,在早期诱导TD发生,后期减轻肉鸡TD症状;GSTA3能够对福美双诱导肉鸡TD的作用产生影响。

2018 Vol. 49 (4): 811-817 [摘要] ( 27 ) [HTML 1KB] [PDF 1399KB] ( 56 )
818 王喜红, 朱利娟, 易想炼, 赵静, 向思亭, 谭柱良, 袁志航, 易金娥
桦木酸对环磷酰胺致小鼠肠道氧化损伤的影响

旨在研究桦木酸(betulinic acid,BA)对环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)致小鼠肠道氧化损伤的影响。将健康雄性昆明小鼠随机分为5组:对照(NC)组、Cy组、0.5 mg·kg-1 BA组、5.0 mg·kg-1 BA组、50.0 mg·kg-1 BA组。NC组和Cy组灌服1%的可溶性淀粉,其余各组按不同剂量的BA混悬于可溶性淀粉中灌服,1次·d-1,连续14 d后,除NC组注射生理盐水外,其余4组均连续2 d腹腔注射Cy(50 mg·kg-1)诱导肠氧化损伤模型。检测肝、脾和胸腺指数,肠黏膜中分泌型免疫球蛋白α(secretory immunoglobulin a,SIgA)水平,血清和肠道中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量变化。结果表明:BA预处理后,能缓解Cy引起的肝、脾和胸腺指数下降,促进肠黏膜SIgA的分泌,不同程度缓解了Cy引起小鼠血清和小肠MDA、GSH含量的升高,以中剂量效果最佳,BA对SOD活力无影响。结果表明BA能改善Cy引起的小鼠肠道脂质过氧化及提高肠道中SIgA的分泌,对Cy诱导的肠道氧化损伤有预防性的保护作用。

2018 Vol. 49 (4): 818-824 [摘要] ( 37 ) [HTML 1KB] [PDF 843KB] ( 69 )
研究简报
825 安清明, 周辉通, 刘秀, 李少斌, 罗玉柱, Jon G. Hickford
ADIPOQ基因单体型与不同性别绵羊生长性状的关联分析

旨在探讨ADIPOQ基因单体型对绵羊生长性状的性别差异,筛选出对绵羊生长性状具有性别差异的单体型,为提高绵羊生产效率及加速遗传改良进程提供依据。本研究以1 185只新西兰罗姆尼羊(公556只,母629只)为研究对象,利用PCR-SSCP方法检测不同性别绵羊中ADIPOQ基因变异及单体型分型情况。利用GLMs模型进行单体型与不同性别绵羊生长性状的关联分析。评估单体型对生长性状的表型影响效应,筛选出对绵羊生长性状具有性别差异的单体型。结果表明,绵羊ADIPOQ基因具有丰富的核苷酸变异及单体型构型,且单体型构型分布频率在不同性别绵羊中存在差异(本试验中单体型D1-A2及D1-C2只在母羔中检测到);关联分析结果表明,ADIPOQ基因单体型对绵羊生长性状的影响存在性别特异性。结果显示,存在单体型A1-A2的公羔群体具有较低的断尾重(P=0.033)、断奶重(P=0.020)和断奶前生长速度(P=0.026);其它单体型未发现对公羔生长性状具有显著性别特异性,且所有被检测的单体型对母羔生长性状均无显著影响。结果提示,ADIPOQ基因单体型构型分布频率在绵羊公、母羔中存在性别差异,且其对绵羊生长性状也具有性别特异性,存在单体型A1-A2的公羔生产性能较低,可以以此作为提高公羔生产性能的理论指导依据。

2018 Vol. 49 (4): 825-832 [摘要] ( 33 ) [HTML 1KB] [PDF 1292KB] ( 53 )
833 常天鹏, 夏江威, 宝金山, 金生云, 朱波, 徐凌洋, 陈燕, 张路培, 高雪, 李俊雅, 高会江
利用两种统计模型对中国肉用西门塔尔牛屠宰性状的全基因组关联分析

旨在利用两种统计模型对中国肉用西门塔尔牛的胴体重和骨重两个屠宰性状进行全基因组关联分析(GWAS),并比较不同模型的分析结果,促进GWAS的方法研究。本研究以1 301头中国肉用西门塔尔牛为试验材料,通过实地采集和测量获得样品和表型数据,通过提取样品DNA,并利用Illumina BovineHD(770K)芯片分型获得基因型数据,采用线性混合模型(LMM)和复合区间定位-线性混合模型(CIM-LMM)两种模型进行关联分析,定位影响目标性状的显著SNPs及候选基因;同时对两种模型的GWAS结果进行对比,探讨模型的优劣。结果表明,CIM-LMM检测到了LMM检测的所有显著SNPs(P<0.05),显示出更高的统计效力。本研究共识别8和7个SNPs分别与胴体重、骨重显著关联,其中有2个SNPs与这两个性状都相关。这些SNPs主要分布于3、5、6、10、14、16、17号染色体上,其中6号和14号染色体显著SNPs分布较为集中;最终找到了11个候选基因,同时探讨了GCNT4ALDH1A2LCORLWDFY3等基因的功能。本研究为中国肉用西门塔尔牛屠宰性状的遗传机理做了探索,并且为GWAS研究方法开拓了新的思路。

2018 Vol. 49 (4): 833-840 [摘要] ( 22 ) [HTML 1KB] [PDF 2169KB] ( 123 )
841 范奎奎, 李强, 杨文雅, 潘登, 李海军, 杜晨光
Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究

旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P<0.01)和8.6的转膜电压及功率(P<0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20% Methanol+1% Triton+1% SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P<0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P<0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。

2018 Vol. 49 (4): 841-846 [摘要] ( 22 ) [HTML 1KB] [PDF 1349KB] ( 56 )
847 马宁, 丛淋淋, 肖建华
1例犬卵巢畸胎瘤合并卵巢间质细胞瘤的病理学分析

本文报道犬卵巢囊性成熟性畸胎瘤并发卵巢间质细胞瘤1例,临床罕见,查阅文献未见报道。1例2岁雌性边境牧羊犬,阴蒂肥大,无发情迹象,偶会出现爬跨行为。腹部触诊平软,无疼痛,但在右中下腹部可触及一鸡蛋大小肿物,质韧,活动范围大。剖腹探查,右侧卵巢可见囊性肿物。对该患犬进行绝育手术,并对其病变卵巢进行组织病理学检查,其结果诊断为卵巢成熟性畸胎瘤及卵巢间质细胞瘤,可见囊性区肿瘤内有皮肤及其附属器官和脂肪多个胚层组织。1年后随访,该犬无任何异常表现,各项生理功能均正常。犬卵巢成熟性畸胎瘤合并卵巢间质细胞瘤在临床上罕见,对于临床相关疾病的诊疗具有一定的借鉴和参考价值。

2018 Vol. 49 (4): 847-851 [摘要] ( 22 ) [HTML 1KB] [PDF 3465KB] ( 58 )
852 罗尚星, 范京惠, 刘宝京, 师乾凯, 侯林杉, 左玉柱
猪丁型冠状病毒与猪流行性腹泻病毒双重实时荧光定量RT-PCR方法的建立和初步应用

猪丁型冠状病毒(PDCoV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)均为致病性冠状病毒,可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列,设计了两对特异性引物,分别扩增其N、M基因保守区,并将其克隆至pMD19-T载体;将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板,建立了一种检测PDCoV和PEDV的双重的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,并对其反应的敏感度、特异性和重复性进行了检测。结果表明,本试验所建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法对PDCoV和PEDV的最低检测量分别为51和32拷贝·μL-1,且与PBoV、TGEV、PRV、PCV2无交叉反应,特异性较好;对2016年至2017年在河北省收集的130份仔猪腹泻样本检测,结果显示,PDCoV的检出率为16.9%,PEDV的检出率为66.2%,二者同时感染的检出率为2.3%,与普通RT-PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为PDCoV和PEDV的诊断及分子流行病学调查提供了一种快速、定量检测方法。

2018 Vol. 49 (4): 852-858 [摘要] ( 26 ) [HTML 1KB] [PDF 1693KB] ( 54 )
859 董建国, 王瑞, 曲哲会, 赵瑜, 刘涛
2014—2015年豫南地区猪流行性腹泻病毒S基因变异分析

为分析河南地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的变异情况,本研究设计合成扩增S基因全长的引物,利用RT-PCR方法,对2014—2015年采集病料中38株PEDV S基因进行扩增、克隆和序列测定,并根据结果构建进化树和进行序列比对分析。S基因进化树分析表明:所有PEDV S基因扩增片段与近年来中国和美国分离的变异毒株亲缘关系较近。序列比对分析表明:扩增的PEDV S基因编码的S蛋白中存在氨基酸的插入和缺失。并且,一些扩增S基因片段在编码的S蛋白的C端有11个氨基酸的缺失。许多扩增的S基因在编码的S蛋白的中和表位COE和2C10区域存在氨基酸突变。这些结果为了解河南地区PEDV变异流行情况和控制PED的暴发提供了基础研究理论。

2018 Vol. 49 (4): 859-864 [摘要] ( 26 ) [HTML 1KB] [PDF 994KB] ( 58 )
865 禇颖, 马文杰, 胡卫国, 陈茹, 邱建华, 郭慧君, 李宏梅
检测鸡TRIM25蛋白的免疫组化方法

为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012 bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达,经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体,该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达,在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内;脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中;肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中。该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据。

2018 Vol. 49 (4): 865-870 [摘要] ( 12 ) [HTML 1KB] [PDF 2295KB] ( 36 )
畜牧兽医学报
 

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